SP 6.5 人眼脈洛膜黑色素瘤，原代細(xì)胞|細(xì)胞系|細(xì)胞株|菌種；細(xì)胞庫(kù)管理規(guī)范，提供的細(xì)胞株背景清楚，提供參考文獻(xiàn)和培養(yǎng)條件！

SP 6.5 人眼脈洛膜黑色素瘤（人眼組織）英國(guó)引入

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基： DMEM，90%；胎牛血清10%。

培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%

傳代方法： 收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。

（二）如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造

成生長(zhǎng)不好。

凍存方法： 凍存液：95%*培養(yǎng)液，5%DMSO

儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存