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細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存方法一.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細(xì)胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個(gè)75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含腫瘤細(xì)胞懸液（1.0ml）加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長，大約3－4天細(xì)胞基質(zhì)會變黃，5....

微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術(shù)－、安瓶管開封1．用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。2．用火焰將安瓿管頂端加熱。3．滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。4．用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)1．用無菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。3．若未能活化，或活化后有...

大腸桿菌一般培養(yǎng)方法使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基組成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,瓊脂15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。具體配置步驟：1.稱藥品按實(shí)際用量計(jì)算后,按配方稱取各種藥品放入大燒杯中.牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶解后倒入大燒杯;也可放在稱量紙上稱量,隨后放入熱水中,牛肉膏使與稱量紙分離,立即取出紙片.蛋白胨極易吸潮,故稱量時(shí)要迅速.2.加熱溶解在燒杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉網(wǎng)上,小火加熱,并用玻棒攪拌,待藥品*溶解...

細(xì)胞傳代的一般方法開始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞（單層細(xì)胞，鏡檢適合）、培養(yǎng)液（MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液）、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶（100m1）、克氏瓶、膠塞、吸管（10ml、1m1）、細(xì)胞吹打管（20ml）（以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌）C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰...

一、常規(guī)操作1.穿著實(shí)驗(yàn)服。自己的白大衣或厚外套，可脫在門外的衣帽架上。2.穿著拖鞋。在緩沖間換下自己的鞋子，盡量避免在緩沖間走動(dòng)、停留。3.細(xì)胞房zui多可4個(gè)人同時(shí)使用。盡量避免在內(nèi)長時(shí)間逗留、交談。二、培養(yǎng)箱使用規(guī)則1.從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手(或手套)，盡量縮短開門時(shí)間和減少開門次數(shù)。注：培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過過濾的潔凈空氣。長時(shí)間敞開或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。2.培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸...

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